Calibre 45 conta a história do vendedor de armas Steve Farrell (Randolph Scott) cujo baú de amostra do Colt 45, é roubada por um bandido (Zachary Scott). Acusado de ser um membro da gangue quando o bandido começa a usar o Colt em seus assaltos, Farrell é obrigado a rastrear os criminosos para conseguir recuperar sua arma e limpar o seu nome.