Conhecida por seu trabalho como "Vi" na série de TV Buffy, a Caça Vampiros e por partes em filmes como Bring It On Again (As Apimentadas - Mandando Ver) e June, assim como o musical da Internet, Dr. Horrible's Sing-Along Blog. Day também é a estrela, roteirista e produtora da série original da web The Guild, um show baseado em sua vida como gamer, dirigido por Sean Michael Becker.
Ela é membro da Mesa de Diretores da International Academy of Web Television. Há pouco tempo participou do 20º episódio da 7ª temporada e também do 11º episódio da 8ª temporada da série Supernatural.

Day começou sua carreira com 7 anos, quando ela estrelou como escoteira em uma produção local de To Kill a Mockingbird. Ela estudou canto e balé profissionalmente, se apresentando em shows e competições nacionais. Educada em casa durante a maior parte de sua infância, Day começou a faculdade com 16 anos.

Ela era uma Acadêmica de Mérito Nacional (1995) e formou-se como oradora de sua turma. Uma violinista talentosa, Day foi aceita na escola de música Juilliard, mas decidiu ir para a Universidade do Texas em Austin com uma bolsa de estudos integral pelo desempenho de violino. Ela se formou duplamente, uma vez em matemática e outro pela sua performance musical. Ela também é uma grande jogadora de videogames. Sendo grande parte do seu trabalho na Web série The guild baseada em suas experiências pessoais com jogos.