Foi um ator e comediante, integrante da primeira formação do célebre programa de televisão Saturday Night Live, na década de 1970. Era irmão do também ator e comediante, James Belushi.

Em 1971, Belushi juntou-se a um grupo de comediantes de Chicago e, um ano mais tarde, graças a sua imitação do cantor Joe Cocker, apresentou-se no espetáculo The National Lampoon's Lemmings, uma paródia de Woodstock.

Em seguida, de 1974 a 1975, comandou um famoso programa humorístico de rádio nos EUA, chamado The National Lampoon's Radio Hour. O primeiro sucesso de John Belushi no cinema foi em O Clube dos Cafajestes, de 1978. Em seguida, chegou a atuar em outros filmes, antes de estrelar Os Irmãos Cara-de Pau, em 1980.

Em 5 de março de 1982, Belushi foi encontrado morto em seu quarto no Bungalow 3 do Chateau Marmont on Sunset Boulevard, em Los Angeles, Califórnia. A causa da morte foi um speedball, uma injeção combinada de cocaína e heroína.